Trouble shooting
물 100% 사용 후 Retention time이 짧아진 컬럼의 재생에 대해서
No.9 물 100% 사용 후 Retention time이 짧아진 컬럼의재생에 대해서
역상HPLC에서는컬럼이 열화되면피크형상이나빠지거나머무름 시간이짧아지기도 합니다.컬럼의 열화는C18등의작용기가 떨어지거나 기본자재실리카겔이용해되는 등충진제가 화학적으로변화하기 때문에일어납니다.따라서 이러한상태의 컬럼을 재생하여사용하기는 어렵습니다.
그런데ODS컬럼에서유기용매를 포함하지 않는물100% 이동상을사용하는 경우, 그림과 같이 화합물의 머무름 시간이급격히 감소할 수 있습니다.
이렇게머무름 시간이 짧아지면,컬럼의열화라고 생각하는분도 많습니다.그러나실제로는컬럼의열화가 아니라소수성이큰C18작용기가 결합된충전제표면과 이동상 물의극성차이가크기 때문에충전제표면이용매를 충분히 받아 들이기 힘들고,충전제의겉보기소수성이 작아져서머무름 시간이 감소한다고생각됩니다.
이 경우유기용매를50%이상 함유한 이동상을 컬럼용량의10배정도 흘려주어서 간단하게초기의 머무름 시간을회복시킬 수 있습니다.이는 이동상과C18작용기의 반발이 작아지고용매로 치환되기 쉬워 지기 때문이라고 생각됩니다.
물100% 이동상의사용에서 머무름시간이감소했을 경우에는유기용매/물의혼합액을 흘려주어 컬럼재생을 시켜 주세요.
Column: |
150 x 4.6 mm I.D. |
Eluent: |
20 mM KH2PO4-K2HPO4 (pH6.9) |
Flow rate: |
1.0 mL/min |
Temperature: |
37°C |
Detector |
UV at 254 nm
|
C18컬럼에서 물 100% 사용문제 영상 : https://youtu.be/Wg1o1ddzpl0
=관련 문의=
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