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HPLC분석관련

이온교환컬럼의 선택을 위한 연구

HPLC분석관련 YMC 2016.11.30

Independent Study Column Selection IEX

개요 

제네바대학과 로잔대학은 각기 다른 제조사의 각기 다른 이온교환컬럼으로 같은 조건에서 비교 실험을 진행했습니다. 크로마토그래피 파라미터는 다음과 같은 관점에서 진행했습니다. :

• 선택성

• 분리능

YMC도 강양이온 논포러스 컬럼인 YMC-BioPro SP-F로 참가했습니다.

결론

치료용 단일클론항체 (mAbs)의 CEX컬럼의 용량은 pH와 salt gradient 모드에서 크로마토그래피 분석을 통해 진행했습니다.

YMC-BioPro SP-F는 선택성과 분리능에서 가장 높은 점수를 받았습니다. (표 1)

Table 1: 양이온교환 컬럼

Column	제조사	CEX	Particle size [μm]	컬럼길이 [mm]
YMC- BioPro SP-F	YMC	Strong (sulfonic)	5	100
M 제품	T 사	Strong (sulfonic)	5	150
P 제품	W 사	Strong (sulfonic)	7	100
A 제품	S 사	Weak (carboxylate)	3	150
B 제품	A 사	Weak (carboxylate)	1.7	50

아래 네 가지 mAb는 크로마토그래피 특성을 확인하기 위해 선정된 단백질입니다.

1. Natalizumab (peak 1) -> 상호작용이 작음 -> 짧은 retention time

YMC-BioPro SP-F 가 가장 샤프한 peak 를 보여주었습니다.

2. 여러가지 mAb의 혼합물인 Cetuximab (peak 2) -> 두번째로 약한 상호작용

YMC-BioPro SP-F 가장 좋은 분리능을 보여주었습니다.

3. Adalimumab (peak 3)과 denosumab (peak 4) 각각의 머무름 특성에 따라 분리.

YMC-BioPro SP-F Salt gradient모드에서 가장 좋은 선택성을 보여주었습니다.

연구결과

분리 성능

Figure 1은 YMC BioPro SP-F, A 제품, M제품, P제 컬럼에서 얻은 크로마토그램으로서 pH와 염의 gradient 모드에서 natalizumab, cetuximab, adalizumab, denosumab을 분석한 데이터입니다. Figure 1에서는 pH gradient 모드에서 나온 데이터를 보여주고, Figure 2는 염의 gradient 모드에서 얻은 크로마토그램을 보여주고 있습니다.

Figure 1: pH gradient모드에서 다른 컬럼으로 얻은 크로마토그램. natalizumab (1), cetuximab (2), adalimumab (3) denosumab (4)

Figure 2: 염 gradient모드에서 다른 컬럼으로 얻은 크로마토그램 natalizumab (1), cetuximab (2), adalimumab (3) denosumab (4)

컬럼 연결을 통한 높은 분리능의 CEX

치료용 mAb 샘플을 얻으려면 높은 peak 용량을 얻을 수 있는 효율적인 컬럼이 필요합니다. 컬럼 연결은 항체의 CEX분석을 위해 매우 유용한 방법입니다. 이는 다른 배치의 크로마토그래피 profile이나 바이오시밀러 제품의 비교를 위해 적절하게 사용될 수 있습니다.

왜냐하면 YMC BioPro SP-F는 natalizumab, cetuximab, adalimumab, denosumab 의 분리에서 가장 높은 분리능을 보였으며, 컬럼 연결을 통해 높은 분리능의 분리를 구현할 수 있기 때문입니다(Figure 3).

Figure 3은 컬럼 길이와 gradient 시간을 연장하여 분리능 향상을 얻을 수 있음을 나타낸 것입니다.

Figure 3: YMC-BioPro SP-F (100 × 4.6 mm, 5 μm) 를 이용한 염 gradient 모드에서의 분리능 측면에서 컬럼길이와 gradient시간(gradient기울기)의 효과

이 연구에서 YMC BioPro SP-F컬럼은 CEX모드에서 mAb의 charge variant 분석을 위한 독보적인 충전제임을 보여주었습니다.

References

[1] S. Fekete, A. Beck, D. Guillarme, Characterisation of cation exchanger stationary phases applied for the separations of therapeutic monoclonal antibodies, J. Pharm. Biomed. Anal., 2015, 111, 169–176.

[2] S. Fekete, M. Dong, T. Zhang, D. Guillarme, High resolution reversed phase analysis of recombinant monoclonal antibodies by ultra-high pressure liquid chromatography column coupling, J. Pharm. Biomed. Anal., 2013, 83, 273–278.

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정보통신망이용촉진및정보보호등에관한법률 [시행 2019. 6. 25.] [법률 제16021호, 2018. 12. 24., 일부개정]

제 50조 (영리목적의 광고성 정보 전송 제한)

1.누구든지 전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하려면 그 수신자의 명시적인 사전 동의를 받아야 한다. 다만, 다음 각 호의 어느 하나에 해당하는 경우에는 사전 동의를 받지 아니한다. <개정 2016. 3. 22.>

①재화등의 거래관계를 통하여 수신자로부터 직접 연락처를 수집한 자가 대통령령으로 정한 기간 이내에 자신이 처리하고 수신자와 거래한 것과 동종의 재화등에 대한 영리목적의 광고성 정보를 전송하려는 경우
②「방문판매 등에 관한 법률」에 따른 전화권유판매자가 육성으로 수신자에게 개인정보의 수집출처를 고지하고 전화권유를 하는 경우

2.전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하려는 자는 제1항에도 불구하고 수신자가 수신거부의사를 표시하거나 사전 동의를 철회한 경우에는 영리목적의 광고성 정보를 전송하여서는 아니 된다.
3.오후 9시부터 그 다음 날 오전 8시까지의 시간에 전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하려는 자는 제1항에도 불구하고 그 수신자로부터 별도의 사전 동의를 받아야 한다. 다만, 대통령령으로 정하는 매체의 경우에는 그러하지 아니하다.
4.전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하는 자는 대통령령으로 정하는 바에 따라 다음 각 호의 사항 등을 광고성 정보에 구체적으로 밝혀야 한다.

①전송자의 명칭 및 연락처
②수신의 거부 또는 수신동의의 철회 의사표시를 쉽게 할 수 있는 조치 및 방법에 관한 사항

5.전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하는 자는 다음 각 호의 어느 하나에 해당하는 행위를 하여서는 아니 된다. <개정 2024. 1. 23.>

①광고성 정보 수신자의 수신거부 또는 수신동의의 철회를 회피ㆍ방해하는 행위
②숫자ㆍ부호 또는 문자를 조합하여 전화번호ㆍ전자우편주소 등 수신자의 연락처를 자동으로 만들어 내는 행위
③영리목적의 광고성 정보를 전송할 목적으로 전화번호 또는 전자우편주소를 자동으로 등록하는 행위
④광고성 정보 전송자의 신원이나 광고 전송 출처를 감추기 위한 각종 행위
⑤영리목적의 광고성 정보를 전송할 목적으로 수신자를 기망하여 회신을 유도하는 각종 행위

6.전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하는 자는 수신자가 수신거부나 수신동의의 철회를 할 때 발생하는 전화요금 등의 금전적 비용을 수신자가 부담하지 아니하도록 대통령령으로 정하는 바에 따라 필요한 조치를 하여야 한다.
7.전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하려는 자는 수신자가 제1항 및 제3항에 따른 수신동의, 제2항에 따른 수신거부 또는 수신동의 철회에 관한 의사를 표시할 때에는 해당 수신자에게 대통령령으로 정하는 바에 따라 수신동의, 수신거부 또는 수신동의 철회에 대한 처리 결과를 알려야 한다. <개정 2024. 1. 23.>
8.제1항 또는 제3항에 따라 수신동의를 받은 자는 대통령령으로 정하는 바에 따라 정기적으로 광고성 정보 수신자의 수신동의 여부를 확인하여야 한다.

[전문개정 2014. 5. 28.]

[시행일: 2024. 7. 24.] 제50조

제 74조 (벌칙)

1.다음 각 호의 어느 하나에 해당하는 자는 1년 이하의 징역 또는 1천만원 이하의 벌금에 처한다. <개정 2012. 2. 17., 2014. 5. 28.>

①제8조제4항을 위반하여 비슷한 표시를 한 제품을 표시ㆍ판매 또는 판매할 목적으로 진열한 자
②제44조의7제1항제1호를 위반하여 음란한 부호ㆍ문언ㆍ음향ㆍ화상 또는 영상을 배포ㆍ판매ㆍ임대하거나 공공연하게 전시한 자
③제44조의7제1항제3호를 위반하여 공포심이나 불안감을 유발하는 부호ㆍ문언ㆍ음향ㆍ화상 또는 영상을 반복적으로 상대방에게 도달하게 한 자
④제50조제5항을 위반하여 조치를 한 자
⑤삭제 <2014. 5. 28.>
⑥삭제 <2024. 1. 23.>
⑦제53조제4항을 위반하여 등록사항의 변경등록 또는 사업의 양도ㆍ양수 또는 합병ㆍ상속의 신고를 하지 아니한 자

2.제1항제3호의 죄는 피해자가 구체적으로 밝힌 의사에 반하여 공소를 제기할 수 없다.

[전문개정 2008. 6. 13.]