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HPLC분석관련

Peptide 분리의 Tip

HPLC분석관련 YMC 2016.11.04

Defensin은 작은 분자의 항균 펩타이드입니다. 동물과 식물에서는 미생물에 대항하는 중요한 역할을 수행하고 있습니다. 본 연구에서는 RP-HPLC에서 펩타이드를 분리하는 두 가지 중요한 파라미터가 method development에 미치는 영향에 대해 파악해보고자 합니다.

I 온도

II 이동상

아래 3가지 defensing 펩타이드는 하나의 아미노산만 차이를 가지는 구조입니다.

Defensin는 초기에 UHPLC컬럼에서 분리를 달성하지 못했습니다.

Column	YMC-Triart C18, 1.9 μm, 12 nm, 50 x 2.0 mm ID
Part No.	TA12SP9-0502PT
Eluent	A) water / TFA (100/0.1) B) acetonitrile / TFA (100/0.1) 25-45%B (0-5 min)
Flow rate	0.4 mL/min
Detection	220nm
Temperature	40°C

Figure 1: 초기 3가지 defensin의 UHPLC크로마토그램

I 온도 최적화

Figure 2: 온도최적화

II 이동상

펩타이드의 이온성향에 따라 첨가하는 산의 타입이나 농도가 분리에 영향을 미치기 때문에 method development 시에 고려해야 합니다.

Figure 3: 이동상 최적화(a-d)

추가로 gradient의 변화, 유기용매 함량의 변화는 또 다른 방법이 될 수 있습니다.

Figure 4: 이동상 최적화(a-b)

1. α-Defensin-1

2. α-Defensin-2

3. α-Defensin-3

세가지 defensin은 하나의 아미노산 차이만을 가지지만 baseline분리를 달성할 수 있었습니다. 중요 파라미터들은 펩타이드 분리 최적화에 고려되어야 할 사항입니다.

-온도

-이동상 (esp. 산의 타입, 농도).

그러므로 컬럼의 선택에서 Method development를 위한 유연성의 제공여부와 사용함에서 있어 충분한 재현성은 매우 중요한 요소입니다. 본 application에서 예를 들자면 pH와 온도에 안정한 컬럼을 사용해야 합니다. YMC Triart C18은 펩타이드 분리에 이상적인 선택이며 여러분의 컬럼 screening set(펩타이드 뿐만 아니라 모든 분석물에 있어서)에 포함시키는 것을 권장해드립니다.

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제 19조 (분쟁의 해결)

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[ 부칙 ]

1.이 약관은 2015년 8월 1일부터 시행합니다.
2.본 약관에서 규정되지 아니한 사항에 대해서는 국내법에서 정한 관계 법령 및 상 관행에 따릅니다.

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정보통신망이용촉진및정보보호등에관한법률 [시행 2019. 6. 25.] [법률 제16021호, 2018. 12. 24., 일부개정]

제 50조 (영리목적의 광고성 정보 전송 제한)

1.누구든지 전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하려면 그 수신자의 명시적인 사전 동의를 받아야 한다. 다만, 다음 각 호의 어느 하나에 해당하는 경우에는 사전 동의를 받지 아니한다. <개정 2016. 3. 22.>

①재화등의 거래관계를 통하여 수신자로부터 직접 연락처를 수집한 자가 대통령령으로 정한 기간 이내에 자신이 처리하고 수신자와 거래한 것과 동종의 재화등에 대한 영리목적의 광고성 정보를 전송하려는 경우
②「방문판매 등에 관한 법률」에 따른 전화권유판매자가 육성으로 수신자에게 개인정보의 수집출처를 고지하고 전화권유를 하는 경우

2.전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하려는 자는 제1항에도 불구하고 수신자가 수신거부의사를 표시하거나 사전 동의를 철회한 경우에는 영리목적의 광고성 정보를 전송하여서는 아니 된다.
3.오후 9시부터 그 다음 날 오전 8시까지의 시간에 전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하려는 자는 제1항에도 불구하고 그 수신자로부터 별도의 사전 동의를 받아야 한다. 다만, 대통령령으로 정하는 매체의 경우에는 그러하지 아니하다.
4.전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하는 자는 대통령령으로 정하는 바에 따라 다음 각 호의 사항 등을 광고성 정보에 구체적으로 밝혀야 한다.

①전송자의 명칭 및 연락처
②수신의 거부 또는 수신동의의 철회 의사표시를 쉽게 할 수 있는 조치 및 방법에 관한 사항

5.전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하는 자는 다음 각 호의 어느 하나에 해당하는 행위를 하여서는 아니 된다. <개정 2024. 1. 23.>

①광고성 정보 수신자의 수신거부 또는 수신동의의 철회를 회피ㆍ방해하는 행위
②숫자ㆍ부호 또는 문자를 조합하여 전화번호ㆍ전자우편주소 등 수신자의 연락처를 자동으로 만들어 내는 행위
③영리목적의 광고성 정보를 전송할 목적으로 전화번호 또는 전자우편주소를 자동으로 등록하는 행위
④광고성 정보 전송자의 신원이나 광고 전송 출처를 감추기 위한 각종 행위
⑤영리목적의 광고성 정보를 전송할 목적으로 수신자를 기망하여 회신을 유도하는 각종 행위

6.전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하는 자는 수신자가 수신거부나 수신동의의 철회를 할 때 발생하는 전화요금 등의 금전적 비용을 수신자가 부담하지 아니하도록 대통령령으로 정하는 바에 따라 필요한 조치를 하여야 한다.
7.전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하려는 자는 수신자가 제1항 및 제3항에 따른 수신동의, 제2항에 따른 수신거부 또는 수신동의 철회에 관한 의사를 표시할 때에는 해당 수신자에게 대통령령으로 정하는 바에 따라 수신동의, 수신거부 또는 수신동의 철회에 대한 처리 결과를 알려야 한다. <개정 2024. 1. 23.>
8.제1항 또는 제3항에 따라 수신동의를 받은 자는 대통령령으로 정하는 바에 따라 정기적으로 광고성 정보 수신자의 수신동의 여부를 확인하여야 한다.

[전문개정 2014. 5. 28.]

[시행일: 2024. 7. 24.] 제50조

제 74조 (벌칙)

1.다음 각 호의 어느 하나에 해당하는 자는 1년 이하의 징역 또는 1천만원 이하의 벌금에 처한다. <개정 2012. 2. 17., 2014. 5. 28.>

①제8조제4항을 위반하여 비슷한 표시를 한 제품을 표시ㆍ판매 또는 판매할 목적으로 진열한 자
②제44조의7제1항제1호를 위반하여 음란한 부호ㆍ문언ㆍ음향ㆍ화상 또는 영상을 배포ㆍ판매ㆍ임대하거나 공공연하게 전시한 자
③제44조의7제1항제3호를 위반하여 공포심이나 불안감을 유발하는 부호ㆍ문언ㆍ음향ㆍ화상 또는 영상을 반복적으로 상대방에게 도달하게 한 자
④제50조제5항을 위반하여 조치를 한 자
⑤삭제 <2014. 5. 28.>
⑥삭제 <2024. 1. 23.>
⑦제53조제4항을 위반하여 등록사항의 변경등록 또는 사업의 양도ㆍ양수 또는 합병ㆍ상속의 신고를 하지 아니한 자

2.제1항제3호의 죄는 피해자가 구체적으로 밝힌 의사에 반하여 공소를 제기할 수 없다.

[전문개정 2008. 6. 13.]