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HPLC분석관련

인삼에서 Ginsenoside의 분리정제

HPLC분석관련 YMC 2016.08.30

Semi-Preparative Seperation of Ginsenoside in Ginseng

인삼은 해열, 혈압조절, 소염, 지혈, 강심작용, 항암작용, 당뇨병 등에 폭 넓은 효능이 있다고 알려져 있습니다. 인삼에는 사포닌의 일종인 진세노사이드(Ginsenoside)가 많이 들어 있습니다. 그 가운데 Rb1은 진정효과 Rg1은 면역기능강화 등에 효과가 있다고 알려져 있습니다.

분석용 HPLC에서 기울기(gradient)용리법을 이용하여 인삼분말에서 Rb1과 Rg1의 분리를 진행하고 세미분취HPLC(Semi-preparative HPLC)를 이용하여 스케일업을 실시하고 Rb1과 Rg1을 분취하였습니다.

[전처리]

인삼분말 1.0g을 정확히 칭량하여 원심분리관에 넣는다.
60%메탄올 30ml을 첨가하여 15분간 진탕한다.
원심분리(3000rpm, 10min)를 실시하고 상등액을 50ml 메스플라스크에 넣는다.
잔류물에 60% 메탄올 20ml를 첨가하여 동일한 과정을 반복한다.
60% 메탄올로 50ml 메스플라스크에 매스업한다.

아래 그림에 인삼분말 추출물을 분석용 HPLC에서 측정한 결과를 나타내었습니다. Ginsenoside Rb1과 Rg1의 보존력이 다르기 때문에 기울기용리법을 시용하여 분리시험을 진행했습니다. 검출기는 PDA검출기를 사용하여 스펙트럼을 비교하면서 검출물중에 협잡물을 확인하여 분리를 향상시켰습니다. 16분이내에 양호한 분리를 얻을 수 있었습니다.

분석에서 적절한 데이터를 얻었기 때문에 이를 세미분취스케일로 스케일업을 진행했습니다.

다량의 Ginsenoside를 얻기 위해 주입량도 5ml로 늘렸습니다. 그 결과 분석용 HPLC와 크게 다르지 않는 크로마토그램을 아래와 같이 얻을 수 있었습니다. 하지만 Rb1의 경우에는 피크 뒤쪽에 협잡물 피크가 나타나는 것으로 보아 피크 전체를 분취할 경우 고순도의 ginsenoside를 얻기 어려운 것으로 판단되었습니다.

따라서 아래 그림과 같이 Rb1의 경우 순도가 높게 나오는 구간만을 분취하였습니다.

분취물은 분석용 HPLC를 이용하여 다시 한번 목표순도가 나오는 지 확인하였습니다. Rb1의 경우 바로 뒤에 약간의 협잡물이 검출되었지만 목표순도를 만족하였기 때문에 원하는 분리를 얻을 수 있었다고 말할 수 있습니다.

<팁>

이동상을 기울기법으로 진행하실경우 baseline이 변화하여 정확한 레벨이나 슬로프를 측정하기 어려운 경우가 생길 수 있습니다. 예를 들어 목적성분이 짧은파장의 UV에서만 흡광이 될 경우 짧은 파장의 UV가 이동상의 유기용매의 영향으로 Baseline이 상승하는 경우가 생길 수 있습니다. 이번 분석은 203nm의 매우 짧은 검출파장을 이용하였기 때문에 짧은 파장에서 흡광이 있는 메탄올의 경우 이 방법을 사용하여 분석을 진행할 수 있습니다. 아래와 같이 Blank 크로마토그래피를 끈 상태에서는 기울기용리에서 유기용매 함량이 증가할수록 baseline이 올라가는 것을 볼 수 있습니다. 이런 경우 blank를 분석한 후 실제 분석 시 blank 크로마토그래피를 On 상태로 하여 baseline에서 blank를 감안하여 분석이 가능하도록 진행할 수 있습니다.

Application과 관련하여 더 자세한 내용을 원하시면 YMC로 연락부탁드립니다.

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3.통지합니다. 다만 회사가 긴급하게 이용정지 필요가 있다고 인정하는 경우에는 그러하지 않습니다. 위의 규정에 의해 이용 제한을 하고자 하는 경우, 회사는 사유, 일시 및 기간을 정해 해당 회원에게 서면 혹은 전화 등으로
4.회사는 이용제한 기간 중 그 사유가 해소된 것이 확인된 경우에는 이용제한 조치를 즉시 해제합니다.
5.이용제한을 통지 받은 회원이 그에 대해 이의가 있을 때에는 이의신청을 할 수 있습니다.
6.회사는 위의 이의 신청에 대해 그 확인을 위한 기간까지 이용정지를 일시 연기할 수 있으며, 그 결과를 이용자에게 통지합니다.

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제 18조 (면책 조항)

1.회사는 천재지변 기타 이에 준하는 불가항력으로 인하여 서비스를 제공할 수 없을 경우에는 서비스 제공 중지에 관한 책임을 면합니다.
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제 19조 (분쟁의 해결)

와이엠씨코리아와 회원간의 서비스로부터 발생하거나 서비스와 관련하여 발생하는 모든 분쟁 및 본 약관의 해석, 수행, 종결 등과 관련한 최종 판결은 회사 소재지의 관할법원으로 합니다.

[ 부칙 ]

1.이 약관은 2015년 8월 1일부터 시행합니다.
2.본 약관에서 규정되지 아니한 사항에 대해서는 국내법에서 정한 관계 법령 및 상 관행에 따릅니다.

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제 50조 (영리목적의 광고성 정보 전송 제한)

1.누구든지 전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하려면 그 수신자의 명시적인 사전 동의를 받아야 한다. 다만, 다음 각 호의 어느 하나에 해당하는 경우에는 사전 동의를 받지 아니한다. <개정 2016. 3. 22.>

①재화등의 거래관계를 통하여 수신자로부터 직접 연락처를 수집한 자가 대통령령으로 정한 기간 이내에 자신이 처리하고 수신자와 거래한 것과 동종의 재화등에 대한 영리목적의 광고성 정보를 전송하려는 경우
②「방문판매 등에 관한 법률」에 따른 전화권유판매자가 육성으로 수신자에게 개인정보의 수집출처를 고지하고 전화권유를 하는 경우

2.전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하려는 자는 제1항에도 불구하고 수신자가 수신거부의사를 표시하거나 사전 동의를 철회한 경우에는 영리목적의 광고성 정보를 전송하여서는 아니 된다.
3.오후 9시부터 그 다음 날 오전 8시까지의 시간에 전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하려는 자는 제1항에도 불구하고 그 수신자로부터 별도의 사전 동의를 받아야 한다. 다만, 대통령령으로 정하는 매체의 경우에는 그러하지 아니하다.
4.전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하는 자는 대통령령으로 정하는 바에 따라 다음 각 호의 사항 등을 광고성 정보에 구체적으로 밝혀야 한다.

①전송자의 명칭 및 연락처
②수신의 거부 또는 수신동의의 철회 의사표시를 쉽게 할 수 있는 조치 및 방법에 관한 사항

5.전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하는 자는 다음 각 호의 어느 하나에 해당하는 행위를 하여서는 아니 된다. <개정 2024. 1. 23.>

①광고성 정보 수신자의 수신거부 또는 수신동의의 철회를 회피ㆍ방해하는 행위
②숫자ㆍ부호 또는 문자를 조합하여 전화번호ㆍ전자우편주소 등 수신자의 연락처를 자동으로 만들어 내는 행위
③영리목적의 광고성 정보를 전송할 목적으로 전화번호 또는 전자우편주소를 자동으로 등록하는 행위
④광고성 정보 전송자의 신원이나 광고 전송 출처를 감추기 위한 각종 행위
⑤영리목적의 광고성 정보를 전송할 목적으로 수신자를 기망하여 회신을 유도하는 각종 행위

6.전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하는 자는 수신자가 수신거부나 수신동의의 철회를 할 때 발생하는 전화요금 등의 금전적 비용을 수신자가 부담하지 아니하도록 대통령령으로 정하는 바에 따라 필요한 조치를 하여야 한다.
7.전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하려는 자는 수신자가 제1항 및 제3항에 따른 수신동의, 제2항에 따른 수신거부 또는 수신동의 철회에 관한 의사를 표시할 때에는 해당 수신자에게 대통령령으로 정하는 바에 따라 수신동의, 수신거부 또는 수신동의 철회에 대한 처리 결과를 알려야 한다. <개정 2024. 1. 23.>
8.제1항 또는 제3항에 따라 수신동의를 받은 자는 대통령령으로 정하는 바에 따라 정기적으로 광고성 정보 수신자의 수신동의 여부를 확인하여야 한다.

[전문개정 2014. 5. 28.]

[시행일: 2024. 7. 24.] 제50조

제 74조 (벌칙)

1.다음 각 호의 어느 하나에 해당하는 자는 1년 이하의 징역 또는 1천만원 이하의 벌금에 처한다. <개정 2012. 2. 17., 2014. 5. 28.>

①제8조제4항을 위반하여 비슷한 표시를 한 제품을 표시ㆍ판매 또는 판매할 목적으로 진열한 자
②제44조의7제1항제1호를 위반하여 음란한 부호ㆍ문언ㆍ음향ㆍ화상 또는 영상을 배포ㆍ판매ㆍ임대하거나 공공연하게 전시한 자
③제44조의7제1항제3호를 위반하여 공포심이나 불안감을 유발하는 부호ㆍ문언ㆍ음향ㆍ화상 또는 영상을 반복적으로 상대방에게 도달하게 한 자
④제50조제5항을 위반하여 조치를 한 자
⑤삭제 <2014. 5. 28.>
⑥삭제 <2024. 1. 23.>
⑦제53조제4항을 위반하여 등록사항의 변경등록 또는 사업의 양도ㆍ양수 또는 합병ㆍ상속의 신고를 하지 아니한 자

2.제1항제3호의 죄는 피해자가 구체적으로 밝힌 의사에 반하여 공소를 제기할 수 없다.

[전문개정 2008. 6. 13.]