HPLC분석관련
BioPro SmartSep을 이용한 단일클론항체의 분리정제 (ex. Adalimumab)
Purification of monoclonal antibodies with BioPro SmartSep
이온교환수지(IEX)는 단백질이나 펩타이드 또는 단일클론항체 등 바이오물질의 분석이나 정제에 널리 사용되고 있습니다. 이 중 생산 스케일에서의 이온교환수지는 initial capture, intermediate purification, final product polishing 단계에서 사용되고 있습니다.
단일클론항체(mAb)의 정제에 있어서의 난제
단일클론항체의 정제를 위해서는 분리물질에 따라 높은 요구사항에 직면하게 됩니다. 샘플을 컬럼에 주입했을 때 lgG의 결합특성에 따른 영향을 미치는 변수로는 pH, 선속도 또는 염의 농도(전도도) 등이 있습니다. 따라서, 안정성이 높은 물질을 얻고자 한다면 이런 변수들을 고려해야 합니다. 본 포스트에서는 YMC BioPro 충전제의 성능을 입증하기 위하여 몇 가지 과제를 수행하였습니다.
• 아달리무맙(Adalimumab,Generic 휴미라 Humira)의 정제
• pH의 영향
• 선속도의 영향
• 염농도의 영향
Purification Scheme for Adalimumab
Column |
50 x 5.0 mm ID |
Eluent |
A) 20 mM citric acid-NaOH (pH 5.3) B) Eluent A containing 0.5 M NaCl |
Gradient |
0-100% B (0-30 CV) |
Flow rate |
180 cm/hr (0.59 mL/min) |
Temperature |
Ambient |
Detection |
UV at 280 nm |
Sample |
Anti-hTNFalpha Adalimumab (after affinity chromatography) |
lgG Load |
0.1 mg |
Injection |
0.25 mL |
다른 이동상 조건에서의 BioPro SmartSep의 특성에 대한 검증을 위해 실험은 pH의 값, 선속도, 염농도를 다르게 하여 동적결합용량(Dynamic Binding Capacity : DBC)을 측정하였습니다. 변경 실험값은 아래와 같습니다.
실험조건
pH : 6.0 vs. 5.3
선속도 : 200 - 800 cm/hr
염농도: 0 - 50 mM NaCl
Column |
50 x 5.0 mm ID |
Equilibration buffer |
20 mM citric acid-NaOH buffer (pH 5.3 or 6.0) |
Elution buffer |
Equilibration buffer containing 0.5 M NaCl |
Flow rate |
200 - 800 cm/hr (0.66-2.62 mL/min) |
Temperature |
ambient (25°C) |
Detection |
UV at 280 nm |
Sample |
1.5 mg/mL human polyclonal Adalimumab in equilibration buffer |
pH의 영향
DBC (mg/mL-resin, 10% breakthrough) |
||
pH 5.3 |
pH 6.0 |
|
BioPro SmartSep S30 |
110 |
103 |
T사 S type 30㎛ |
61 |
64 |
G사 S type 30㎛ |
58 |
58 |
.
pH와 관계없이 높은 결합용량을 보였습니다. 따라서 아달리무맙(Adalimumab)의 적절한 조건을 선정하면 됩니다.
선속도의 영향
|
DBC (mg/mL-resin, 10% breakthrough) |
||
200 cm/hr |
400 cm/hr |
800 cm/hr |
|
BioPro SmartSep S30 |
110 |
93 |
84 |
T사 S type 30㎛ |
61 |
42 |
26 |
G사 S type 30㎛ |
58 |
58 |
23 |
BioPro SmartSep는 결합용량을 높게 유지시키는 선속도의 범위가 넓게 유지되는 것을 보실 수 있습니다. 이런 특성은 효율을 떨어뜨리지 않으면서 분리 작업의 단위 시간당 생산성을 높일 수 있습니다.
염농도의 영향
DBC (mg/mL-resin, 10% breakthrough) |
|||
pH |
5.3 |
||
NaCl concentration |
0 mM |
25 mM |
50 mM |
Conductivity |
1.36 mS/cm |
4.14 mS/cm |
6.8 mS/cm |
BioPro SmartSep S30 |
107 |
97 |
50 |
T사 S type 30㎛ |
64 |
55 |
27 |
G사 S type 30㎛ |
58 |
49 |
19 |
BioPro SmartSep은 높은 염농도에도 저항력이 있음을 보실 수 있습니다. 이런 특성으로 Protein A 크로마토그래피 이후에 탈염공정을 간단화하거나 생략하여 생산 공정을 최적화시킬 수 있습니다.
결론
BioPro SmartSep 충전제는 단일클론항체의 분리정제에 있어 가장 높은 요구조건을 충족하고 있습니다. pH, 선속도, 염농도에 변화에 있어서도 높은 결합용량을 유지하고 있습니다. 이런 특성은 좀 더 효율적인 정제공정을 구성하시는 데 도움을 드릴 수 있습니다.
• 가장 적합한 (mild한) 조건을 선정할 수 있습니다. • 안정적이면서 높은 단위시간당 생산성을 얻을 수 있습니다. • 탈염공정을 간단화하여 공정을 줄일 수 있습니다.
BioPro SmartSep에 대한 자세한 정보나 상담을 원하시면
YMC Tel)031-716-1631 Fax)031-716-1630 E-mail) info@ymckorea.com Homepage : http://www.ymckorea.com |