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HPLC분석관련

펩타이드 및 단백질의 분리~고온 조건에서 고분리 분석~

HPLC분석관련 YMC 2015.10.30

펩타이드 및 단백질의 분리~고온 조건에서 고분리 분석~

펩타이드나 단백질은 일반컬럼에서는 분리 분석이 잘 안되는 특징을 가지고 있습니다. 본 포스트에서는 Triart C18을 이용하여 분리가 어려운 펩타이드 및 단백질의 분리를 살펴보도록 하겠습니다.

Triart컬럼에 의한 40℃ 및 70℃의 펩타이드 및 단백질의 분리 비교

분자량(MW)이 다른 펩타이드 및 단백질의 분리를 0.1%TFA을 포함한 용리액 조건 하에서, 40℃과 70℃에서 비교하였습니다.

분자량이 큰 펩타이드 및 단백질의 분리에는 이동상에 이소프로판올(IPA)의 첨가가 피크 형상 개선에 유효합니다만, 분자량이 10,000이상의 경우 40℃에서는 브로드한 피크가 되고 있습니다(condition B위 그림).

40℃와 비교하여 70℃의 고온 조건에서는 분리 선택성 변화나 피크 형상의 개선에 의한 분리도가 향상되고 이 효과는 특히 분자량이 큰 경우에 현저하게 나타납니다.

일반적으로 큰 분자는 작은 분자보다 확산 속도가 늦기 때문에 피크가 브로드하게 되는 경향이 있습니다.

고온 조건에서는 이동상 점성의 저하되고 물질 이동 속도가 개선되면서 피크 형상이 개선됩니다.

펩타이드 및 단백질의 분리에서 컬럼 온도의 변경은 분리도의 향상에 효과적입니다.

고온 조건 및 UHPLC용 1.9㎛ 컬럼 연결에 의한 분리도의 향상

헤모글로빈의 트립신 소화물의 분리에서 컬럼 온도를 70℃로 올려서 분석했을 때, Peak capacity(분리 가능 피크 수)가 23%향상되고 있습니다.

입자 지름 1.9㎛, 길이 100 mm의 Triart C18컬럼을 2개 연결하여 분리는 매우 극적으로 향상되고 있습니다. 또 고온 조건 때문에 총 컬럼길이가 200 mm 임에도 대부분의 UHPLC용 시스템의 압력에서 충분히 여유 있는 저압에서 분석 가능합니다. 이런 방법은, 펩타이드 매핑 등 높은 분해능이 요구되는 분리에 유효합니다.

pH 1(1%TFA), 70℃에서 역상 컬럼의 내구성 비교

TFA을 포함한 이동상을 사용하여 분석한 고온 조건은 펩타이드 및 단백질 분리의 향상에 효과적이지만, 통상의 역상 컬럼에서는 컬럼 수명이 문제가 됩니다.

Triart C18및 C8은 신제품 유기 실리카 하이브리드기재로 치밀한 표면 수식을 하고 있기 때문에, 위 그림의 1%TFA, 70℃ 같은 가혹한 조건에서도 탁월한 내구성을 가지고 있습니다. 이 때문에 일반 컬럼에는 적용하기 어려운 조건 분석도 가능합니다.

=관련 문의=

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마.같은 사용자가 다른 ID로 이중등록을 한 경우
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사.정보통신설비의 오작동이나 정보 등의 파괴를 유발시키는 컴퓨터 바이러스 프로그램 등을 유포하는 경우
아.기타 회사가 정한 이용조건에 위반한 경우

3.통지합니다. 다만 회사가 긴급하게 이용정지 필요가 있다고 인정하는 경우에는 그러하지 않습니다. 위의 규정에 의해 이용 제한을 하고자 하는 경우, 회사는 사유, 일시 및 기간을 정해 해당 회원에게 서면 혹은 전화 등으로
4.회사는 이용제한 기간 중 그 사유가 해소된 것이 확인된 경우에는 이용제한 조치를 즉시 해제합니다.
5.이용제한을 통지 받은 회원이 그에 대해 이의가 있을 때에는 이의신청을 할 수 있습니다.
6.회사는 위의 이의 신청에 대해 그 확인을 위한 기간까지 이용정지를 일시 연기할 수 있으며, 그 결과를 이용자에게 통지합니다.

제 17조 (손해배상)

와이엠씨코리아는 무료로 제공되는 홈페이지 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 동 손해가 회사의 중대한 과실에 의한 경우를 제와하고 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.

제 18조 (면책 조항)

1.회사는 천재지변 기타 이에 준하는 불가항력으로 인하여 서비스를 제공할 수 없을 경우에는 서비스 제공 중지에 관한 책임을 면합니다.
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제 19조 (분쟁의 해결)

와이엠씨코리아와 회원간의 서비스로부터 발생하거나 서비스와 관련하여 발생하는 모든 분쟁 및 본 약관의 해석, 수행, 종결 등과 관련한 최종 판결은 회사 소재지의 관할법원으로 합니다.

[ 부칙 ]

1.이 약관은 2015년 8월 1일부터 시행합니다.
2.본 약관에서 규정되지 아니한 사항에 대해서는 국내법에서 정한 관계 법령 및 상 관행에 따릅니다.

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정보통신망이용촉진및정보보호등에관한법률 [시행 2019. 6. 25.] [법률 제16021호, 2018. 12. 24., 일부개정]

제 50조 (영리목적의 광고성 정보 전송 제한)

1.누구든지 전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하려면 그 수신자의 명시적인 사전 동의를 받아야 한다. 다만, 다음 각 호의 어느 하나에 해당하는 경우에는 사전 동의를 받지 아니한다. <개정 2016. 3. 22.>

①재화등의 거래관계를 통하여 수신자로부터 직접 연락처를 수집한 자가 대통령령으로 정한 기간 이내에 자신이 처리하고 수신자와 거래한 것과 동종의 재화등에 대한 영리목적의 광고성 정보를 전송하려는 경우
②「방문판매 등에 관한 법률」에 따른 전화권유판매자가 육성으로 수신자에게 개인정보의 수집출처를 고지하고 전화권유를 하는 경우

2.전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하려는 자는 제1항에도 불구하고 수신자가 수신거부의사를 표시하거나 사전 동의를 철회한 경우에는 영리목적의 광고성 정보를 전송하여서는 아니 된다.
3.오후 9시부터 그 다음 날 오전 8시까지의 시간에 전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하려는 자는 제1항에도 불구하고 그 수신자로부터 별도의 사전 동의를 받아야 한다. 다만, 대통령령으로 정하는 매체의 경우에는 그러하지 아니하다.
4.전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하는 자는 대통령령으로 정하는 바에 따라 다음 각 호의 사항 등을 광고성 정보에 구체적으로 밝혀야 한다.

①전송자의 명칭 및 연락처
②수신의 거부 또는 수신동의의 철회 의사표시를 쉽게 할 수 있는 조치 및 방법에 관한 사항

5.전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하는 자는 다음 각 호의 어느 하나에 해당하는 행위를 하여서는 아니 된다. <개정 2024. 1. 23.>

①광고성 정보 수신자의 수신거부 또는 수신동의의 철회를 회피ㆍ방해하는 행위
②숫자ㆍ부호 또는 문자를 조합하여 전화번호ㆍ전자우편주소 등 수신자의 연락처를 자동으로 만들어 내는 행위
③영리목적의 광고성 정보를 전송할 목적으로 전화번호 또는 전자우편주소를 자동으로 등록하는 행위
④광고성 정보 전송자의 신원이나 광고 전송 출처를 감추기 위한 각종 행위
⑤영리목적의 광고성 정보를 전송할 목적으로 수신자를 기망하여 회신을 유도하는 각종 행위

6.전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하는 자는 수신자가 수신거부나 수신동의의 철회를 할 때 발생하는 전화요금 등의 금전적 비용을 수신자가 부담하지 아니하도록 대통령령으로 정하는 바에 따라 필요한 조치를 하여야 한다.
7.전자적 전송매체를 이용하여 영리목적의 광고성 정보를 전송하려는 자는 수신자가 제1항 및 제3항에 따른 수신동의, 제2항에 따른 수신거부 또는 수신동의 철회에 관한 의사를 표시할 때에는 해당 수신자에게 대통령령으로 정하는 바에 따라 수신동의, 수신거부 또는 수신동의 철회에 대한 처리 결과를 알려야 한다. <개정 2024. 1. 23.>
8.제1항 또는 제3항에 따라 수신동의를 받은 자는 대통령령으로 정하는 바에 따라 정기적으로 광고성 정보 수신자의 수신동의 여부를 확인하여야 한다.

[전문개정 2014. 5. 28.]

[시행일: 2024. 7. 24.] 제50조

제 74조 (벌칙)

1.다음 각 호의 어느 하나에 해당하는 자는 1년 이하의 징역 또는 1천만원 이하의 벌금에 처한다. <개정 2012. 2. 17., 2014. 5. 28.>

①제8조제4항을 위반하여 비슷한 표시를 한 제품을 표시ㆍ판매 또는 판매할 목적으로 진열한 자
②제44조의7제1항제1호를 위반하여 음란한 부호ㆍ문언ㆍ음향ㆍ화상 또는 영상을 배포ㆍ판매ㆍ임대하거나 공공연하게 전시한 자
③제44조의7제1항제3호를 위반하여 공포심이나 불안감을 유발하는 부호ㆍ문언ㆍ음향ㆍ화상 또는 영상을 반복적으로 상대방에게 도달하게 한 자
④제50조제5항을 위반하여 조치를 한 자
⑤삭제 <2014. 5. 28.>
⑥삭제 <2024. 1. 23.>
⑦제53조제4항을 위반하여 등록사항의 변경등록 또는 사업의 양도ㆍ양수 또는 합병ㆍ상속의 신고를 하지 아니한 자

2.제1항제3호의 죄는 피해자가 구체적으로 밝힌 의사에 반하여 공소를 제기할 수 없다.

[전문개정 2008. 6. 13.]