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Peptide 분리의 Tip
Defensin은 작은 분자의 항균 펩타이드입니다. 동물과 식물에서는 미생물에 대항하는 중요한 역할을 수행하고 있습니다. 본 연구에서는 RP-HPLC에서 펩타이드를 분리하는 두 가지 중요한 파라미터가 method development에 미치는 영향에 대해 파악해보고자 합니다.
I 온도
II 이동상
아래 3가지 defensing 펩타이드는 하나의 아미노산만 차이를 가지는 구조입니다.
Defensin는 초기에 UHPLC컬럼에서 분리를 달성하지 못했습니다.
Column |
YMC-Triart C18, 1.9 μm, 12 nm, 50 x 2.0 mm ID |
Part No. |
TA12SP9-0502PT |
Eluent |
A) water / TFA (100/0.1) B) acetonitrile / TFA (100/0.1) 25-45%B (0-5 min) |
Flow rate |
0.4 mL/min |
Detection |
220nm |
Temperature |
40°C |
Figure 1: 초기 3가지 defensin의 UHPLC크로마토그램
I 온도 최적화
Figure 2: 온도최적화
II 이동상
펩타이드의 이온성향에 따라 첨가하는 산의 타입이나 농도가 분리에 영향을 미치기 때문에 method development 시에 고려해야 합니다.
Figure 3: 이동상 최적화(a-d)
추가로 gradient의 변화, 유기용매 함량의 변화는 또 다른 방법이 될 수 있습니다.
Figure 4: 이동상 최적화(a-b)
1. α-Defensin-1
2. α-Defensin-2
3. α-Defensin-3
세가지 defensin은 하나의 아미노산 차이만을 가지지만 baseline분리를 달성할 수 있었습니다. 중요 파라미터들은 펩타이드 분리 최적화에 고려되어야 할 사항입니다.
-온도
-이동상 (esp. 산의 타입, 농도).
그러므로 컬럼의 선택에서 Method development를 위한 유연성의 제공여부와 사용함에서 있어 충분한 재현성은 매우 중요한 요소입니다. 본 application에서 예를 들자면 pH와 온도에 안정한 컬럼을 사용해야 합니다. YMC Triart C18은 펩타이드 분리에 이상적인 선택이며 여러분의 컬럼 screening set(펩타이드 뿐만 아니라 모든 분석물에 있어서)에 포함시키는 것을 권장해드립니다.
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