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항곰팡이제 spiroxamine의 LC-MS분리
Spiroxamine은 Bayer CropScience에서 판매하는 침투성 항곰팡이제입니다. 이 물질은 A와 B의 부분입체이성질체(diastereomers)의 혼합물로 A1, A2, B1, B2 총 4가지의 거울상이성질체(enantiomers)를 가지는 물질입니다.
LC-MS 를 위한Chiral Method
Bayer CropScience는 미량분석영역에서 spiroxamine의 잔류량을 분석하기 위해LC-MS/MS를 이용하여 발전된 새로운 영역의 LC 기반 spiroxamine chiral 분리방법을 찾고 있었습니다. YMC는 Water, Ethanol, Diethylamine의 이동상을 CHIRAL ART Amylose-SA컬럼에 채용하여 발전된 새로운 Chiral Method를 확립할 수 있었습니다.
Existing Chiral Normal Phase Separation
Bayer CropScience는 이 부분입체이성질체와 거울상 이성질체를 분리할 수 있는 Chiral Method를 확립하고 있었습니다1. 하지만 코팅형다당류 유도체 컬럼으로 순상(NP)조건에서만 사용할 수 있습니다. 조건은 n-heptane, isopropanol의 이동상을 이용하였습니다.
먼저 YMC 는 동일한 chiral selector의 CHIRAL ART Cellulose-C컬럼을 통해 동등한 분리를 재현할 수 있었습니다.
Chiral RP Screening
역상조건을 적용하기 위해 YMC는 역상조건(RP)에서 모든 고정형 chiral 컬럼(CHIRAL ART Amylose-SA, Cellulose-SB, Cellulose-SC)을 테스트했습니다. 이 과정에서 CHIRAL ART Amylose-SA 컬럼에서 충분한 분리를 얻을 수 있었습니다.
Chiral RP Separation in less than 20 Minutes
조건에서 Diethylamine을 첨가함으로써 4가지의 isomer를 모두 분리할 수 있었을 뿐만 아니라 총 분석시간이 단 20분내로 줄어드는 효과를 볼 수 있었습니다.
CHIRAL ART Amylose-SA (3 µm, 150 x 3.0 mm ID)에서 Method 최적화
LC-UV 에서 LC-MS/MS로의 전환
Bayer CropScience는 YMC가 제공한 본 어플리케이션을 High-end triple-quadrupole mass spectromer를 이용한 LC-MS/MS에 셋업했습니다.
Diethylamine은 이온화 과정에서 강한 영향력과 MS시그널을 99% 정도 "줄일 수" 있도록Ammonium carbonate 용액(pH 9.5)으로 대체되었습니다.
포도추출물에서 거울상이성질체 A1의 검출예 [ S. Stuke, Bayer CropScience 제공].
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