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인삼에서 Ginsenoside의 분리정제
Semi-Preparative Seperation of Ginsenoside in Ginseng
인삼은 해열, 혈압조절, 소염, 지혈, 강심작용, 항암작용, 당뇨병 등에 폭 넓은 효능이 있다고 알려져 있습니다. 인삼에는 사포닌의 일종인 진세노사이드(Ginsenoside)가 많이 들어 있습니다. 그 가운데 Rb1은 진정효과 Rg1은 면역기능강화 등에 효과가 있다고 알려져 있습니다.
분석용 HPLC에서 기울기(gradient)용리법을 이용하여 인삼분말에서 Rb1과 Rg1의 분리를 진행하고 세미분취HPLC(Semi-preparative HPLC)를 이용하여 스케일업을 실시하고 Rb1과 Rg1을 분취하였습니다.
[전처리]
아래 그림에 인삼분말 추출물을 분석용 HPLC에서 측정한 결과를 나타내었습니다. Ginsenoside Rb1과 Rg1의 보존력이 다르기 때문에 기울기용리법을 시용하여 분리시험을 진행했습니다. 검출기는 PDA검출기를 사용하여 스펙트럼을 비교하면서 검출물중에 협잡물을 확인하여 분리를 향상시켰습니다. 16분이내에 양호한 분리를 얻을 수 있었습니다.
분석에서 적절한 데이터를 얻었기 때문에 이를 세미분취스케일로 스케일업을 진행했습니다.
다량의 Ginsenoside를 얻기 위해 주입량도 5ml로 늘렸습니다. 그 결과 분석용 HPLC와 크게 다르지 않는 크로마토그램을 아래와 같이 얻을 수 있었습니다. 하지만 Rb1의 경우에는 피크 뒤쪽에 협잡물 피크가 나타나는 것으로 보아 피크 전체를 분취할 경우 고순도의 ginsenoside를 얻기 어려운 것으로 판단되었습니다.
따라서 아래 그림과 같이 Rb1의 경우 순도가 높게 나오는 구간만을 분취하였습니다.
분취물은 분석용 HPLC를 이용하여 다시 한번 목표순도가 나오는 지 확인하였습니다. Rb1의 경우 바로 뒤에 약간의 협잡물이 검출되었지만 목표순도를 만족하였기 때문에 원하는 분리를 얻을 수 있었다고 말할 수 있습니다.
<팁>
이동상을 기울기법으로 진행하실경우 baseline이 변화하여 정확한 레벨이나 슬로프를 측정하기 어려운 경우가 생길 수 있습니다. 예를 들어 목적성분이 짧은파장의 UV에서만 흡광이 될 경우 짧은 파장의 UV가 이동상의 유기용매의 영향으로 Baseline이 상승하는 경우가 생길 수 있습니다. 이번 분석은 203nm의 매우 짧은 검출파장을 이용하였기 때문에 짧은 파장에서 흡광이 있는 메탄올의 경우 이 방법을 사용하여 분석을 진행할 수 있습니다. 아래와 같이 Blank 크로마토그래피를 끈 상태에서는 기울기용리에서 유기용매 함량이 증가할수록 baseline이 올라가는 것을 볼 수 있습니다. 이런 경우 blank를 분석한 후 실제 분석 시 blank 크로마토그래피를 On 상태로 하여 baseline에서 blank를 감안하여 분석이 가능하도록 진행할 수 있습니다.
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