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펩타이드 및 단백질의 분리~고온 조건에서 고분리 분석~
펩타이드 및 단백질의 분리~고온 조건에서 고분리 분석~
펩타이드나 단백질은 일반컬럼에서는 분리 분석이 잘 안되는 특징을 가지고 있습니다. 본 포스트에서는 Triart C18을 이용하여 분리가 어려운 펩타이드 및 단백질의 분리를 살펴보도록 하겠습니다.
Triart컬럼에 의한 40℃ 및 70℃의 펩타이드 및 단백질의 분리 비교
분자량(MW)이 다른 펩타이드 및 단백질의 분리를 0.1%TFA을 포함한 용리액 조건 하에서, 40℃과 70℃에서 비교하였습니다.
분자량이 큰 펩타이드 및 단백질의 분리에는 이동상에 이소프로판올(IPA)의 첨가가 피크 형상 개선에 유효합니다만, 분자량이 10,000이상의 경우 40℃에서는 브로드한 피크가 되고 있습니다(condition B위 그림).
40℃와 비교하여 70℃의 고온 조건에서는 분리 선택성 변화나 피크 형상의 개선에 의한 분리도가 향상되고 이 효과는 특히 분자량이 큰 경우에 현저하게 나타납니다.
일반적으로 큰 분자는 작은 분자보다 확산 속도가 늦기 때문에 피크가 브로드하게 되는 경향이 있습니다.
고온 조건에서는 이동상 점성의 저하되고 물질 이동 속도가 개선되면서 피크 형상이 개선됩니다.
펩타이드 및 단백질의 분리에서 컬럼 온도의 변경은 분리도의 향상에 효과적입니다.
고온 조건 및 UHPLC용 1.9㎛ 컬럼 연결에 의한 분리도의 향상
헤모글로빈의 트립신 소화물의 분리에서 컬럼 온도를 70℃로 올려서 분석했을 때, Peak capacity(분리 가능 피크 수)가 23%향상되고 있습니다.
입자 지름 1.9㎛, 길이 100 mm의 Triart C18컬럼을 2개 연결하여 분리는 매우 극적으로 향상되고 있습니다. 또 고온 조건 때문에 총 컬럼길이가 200 mm 임에도 대부분의 UHPLC용 시스템의 압력에서 충분히 여유 있는 저압에서 분석 가능합니다. 이런 방법은, 펩타이드 매핑 등 높은 분해능이 요구되는 분리에 유효합니다.
pH 1(1%TFA), 70℃에서 역상 컬럼의 내구성 비교
TFA을 포함한 이동상을 사용하여 분석한 고온 조건은 펩타이드 및 단백질 분리의 향상에 효과적이지만, 통상의 역상 컬럼에서는 컬럼 수명이 문제가 됩니다.
Triart C18및 C8은 신제품 유기 실리카 하이브리드기재로 치밀한 표면 수식을 하고 있기 때문에, 위 그림의 1%TFA, 70℃ 같은 가혹한 조건에서도 탁월한 내구성을 가지고 있습니다. 이 때문에 일반 컬럼에는 적용하기 어려운 조건 분석도 가능합니다.
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