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고스트 피크의 원인(1)
고스트 피크의 원인(1)
기울기분리(gradient)의 검토 과정에서 시료를 주입하지 않는 Blank 분석으로 그림의 (A)처럼 많은 피크가 검출되는 현상이 있을 수 있습니다. 컬럼을 분리하고 같은 조작을 실시하면 (B)처럼 고스트피크가 검출되지 않습니다. 이런 현상의 원인은 컬럼에 있다고 보여집니다.
하지만 컬럼을 세정하고 교환해도 개선되지 않는 경우가 있습니다. 이 현상에서 컬럼 이외의 요인을 검토한 결과 용리액의 조제에 사용하고 있는 물 때문인 것으로 확인 되는 경우도 있습니다. 통상의 증류수(HPLC용이 아닌 것)를 사용한 것이 원인이었습니다. 따라서 HPLC용 증류수로 변경하면 컬럼의 유무에 상관 없이 (B)같은 베이스라인을 얻을 수 있었습니다.
이처럼 기울기분리에서는 물의 순도가 베이스 라인에 큰 영향을 미칩니다. 또한, HPLC용 증류수라도 개봉(구입)후, 날짜가 경과되면 오염이 일어나게 되고 역시 고스트 피크의 원인이 됩니다. Isocratic에서는 문제가 되지 않는 경우에도, 기울기에서 트러블이 일어날 가능성이 있습니다. 기울기분리에서는 유기 용매의 조성비가 낮은 조건으로 컬럼을 초기화하므로, 이 때, 용리액 중의 불순물이 컬럼에 흡착해 농축됩니다. 분석을 시작하여 유기 용매의 조성이 올라가면 흡착된 것이 용출되고 고스트피크가 나타나게 됩니다. 고스트피크의 크기는 초기화의 시간이 길어질수록 커집니다. 컬럼을 장착하지 않는 경우에 고스트 피크가 검출되지 않은 것은 초기화 때에 흡착, 농축이 되지 않았기 때문입니다.
기울기분석에서는 용매의 등급과 관리에 특히 주의하세요.
고스트 peak가 나오는 경우 :https://youtu.be/DtKfbUMVClA
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